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细胞培养中常见的污染及解决方法
黑点污染
黑色的游动点能穿透滤膜并在空气中扩散。电镜形态学观察法是一种比较经典、可靠的方法,被认为是确定细胞凋亡的金标准。它们在低倍镜下显示为黑色圆点,在高倍镜下显示为可移动的黑点。培养液也不浑浊,一般影响较小,因此细胞仍可使用。通常,黑点污染后,细胞生长良好,运动物体无明显增加,培养基的颜色和透明度无明显变化。在同一批培养的细胞中也可以发现类似的现象。
解决方法:黑点对细胞生长状态没有明显影响,细胞增殖后会自然消失,因此除了置换外,无需特殊处理。如果细胞可能被小的运动点污染,建议增加培养皿细胞密度,以提高细胞存活率。
细胞培养中常见的污染及解决方法
真菌污染
真菌污染后,培养基一般清澈,保持原色。(2)碘酒擦拭四肢,再用酒精棉球擦拭,无菌条件下用灭菌消毒后的镊子和剪刀分离出大鼠股骨和胫骨,剔除骨头表面肌肉,PBS溶液冲洗两遍。细丝可以在显微镜下观察到。,一些真菌类似于死细胞碎片,但其中许多清晰可见,看起来像珊瑚,比较容易区分。此外,它们会慢慢长出细细的黑色细丝,因为它们生长得比较慢,不像细菌那样容易被发现,一旦发现培养基被污染,它们将很难存活。
解决方法:一旦被真菌污染,果断丢弃,然后对细胞房、CO2 培养箱、器皿和培养基进行消毒。
Q:如何避免中沉淀物的出现?
A:首先要注意正确的解冻步骤,而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加,使用中应该尽量避免:
(1)热灭活;
(2)在 37℃ 下培养;
(3)反复冻融;
(4)γ 射线照射;
(5)长期储存在 2-8℃;
(6)在室温下放置时间过长
Q:如何去除中的沉淀?
A:如想去除这些絮状沉淀物,可以将分装到无菌离心管中,以 400g 离心,上清液即可直接加入到培养基 内一起过滤。
注意:不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物,因为这可能阻塞滤膜。