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8分钟前 细胞实验外包在线咨询「英瀚斯」[英瀚斯2eefa30]内容：Cell Counting Kit-8（简称CCK-8）是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测试剂。WST-8【化学名：2-(2-甲氧ji-4-硝ji苯ji)-3-(4-硝ji苯ji)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，是一种类似于MTT的化合物，它在电子载体1-甲氧ji-5-甲ji吩嗪鎓硫酸二jia酯（1-Methoxy PMS）存在的情况下，被线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物（formazan）。细胞增殖越多越快，颜色越深；1、直接磁性细胞标记(Directmagneticcelllabeling)(磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞)直接标记是快速、zui特异的磁性标记方法。细胞毒性越大，则颜色越浅，对于同样的细胞，颜色的深浅与活xi胞的数量成正比，因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。

细胞培养中常见的生物污染包括细菌污染、霉菌污染、支原体污染、黑点污染、真菌污染和原生动物污染。这些污染在细胞培养中的特点及相应的解决办法如下：

1.细菌污染

细菌在普通倒置显微镜下呈黑色和细砂状。根据gan染菌的种类不同，可能会呈现不同的形状，培养液一般会变得浑浊、黄色，对细胞生长有明显影响。

解决方法：仔细检查器具的灭菌情况，确保通风时间和高压灭菌器的压力是否足够。重要的是，与培养基接触的移液管等物品如果被污染两次，则可能会导致储存溶液也受到污染。所以一定要注意！(autophagicvacuoloAV)2、在荧光显微镜下采用GFP-LC3融合蛋白来示踪自噬形成由于电镜耗时长，不利于监测(Monitoring)自噬形成，人们利用LC3在自噬形成过程中发生聚集的现象开发出了此技术。下次使用前要检查培养基的浑浊度。此外，建议在培养基中添加抗生su。

Q:中的沉淀物对细胞培养有什么影响？

A:（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它生产商也证明了这一点。

（2）过滤，如果中出现大量的沉淀物，将很难过滤。一般说来，因为在生产工序中已经过 100nm 或者 40nm 的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养 的。在实验室中没有必要再过滤处理，在大规模的细胞培养中往往将直接加到培养基中一起 过滤。同时还可以使用获得的测序结果进行专利等知识产权方面的申请审批。

（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起。研究者可能会在中观察到一些絮状的 沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状 沉淀，因此就断定被污染了。并且当研究者将样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可 以运动的小黑点，因此就更加确认是被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商 确认，但终确定没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将放在 培养箱中培养观察是否有菌，而是将加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进 行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。5ml含不同浓度（104-106/ml）的细胞悬液，置37℃，5％CO2条件下孵育2-4h，弃掉培养液，PBS-T洗涤3次，每次3min。